液相色譜柱是液相色譜的核心部件，它主要起到了分離作用。色譜柱同樣也是一個消耗品，在流動相沖刷的過程和樣品在分析的過程，填料損失和污染使得色譜柱的性能慢慢下降。所以，對于液相色譜尤其是常用的C18柱，需要在**時間內(nèi)對其性能做一個評估，同樣，新的色譜柱也要對色譜柱做一個有效的體檢。

　　液相色譜柱的十大常見故障：

　　1、若操作過程發(fā)現(xiàn)壓力很小，則可能管件連接有漏，注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯誤警告(各組件指示燈均為紅色)，一般為漏液，其中一個感應(yīng)器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點擊On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再點擊操作界面中的Instrument/System On即可。

　　2、連接柱子與管線時，應(yīng)注意擰緊螺絲的力度，過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液，可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異，不要混用，必要時可使用PEEK管及活動接頭;

　　3、操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高，則可能管路已堵，應(yīng)先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞，可用小流量流動相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡)，若還是無法通暢，則需換柱;

　　4、運行過程中自動停泵，可能為壓力超過上限或流動相用完;

　　5、樣品瓶中樣品較少，自動進(jìn)樣器進(jìn)樣針無法到達(dá)液面，可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣高度的辦法，注意設(shè)置時不要使進(jìn)樣針碰到瓶底，微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶;

　　6、自動進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對準(zhǔn)時，需重新定位。

　　7、泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn)，可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題，需更換;

　　8、基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲，可能原因為系統(tǒng)不穩(wěn)定或沒達(dá)到化學(xué)平衡(使其平衡，若用離子對試劑，在使用使需要足夠的時間和溶劑體積，色譜柱才能達(dá)到足夠的平衡)，流動相被污染(更換流動相，清洗儲液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng))，色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱)，檢測器不穩(wěn)定;

　　9、短期有規(guī)則的噪聲，可能原因為泵壓不穩(wěn)或泵脈沖，調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)(如兩種溶劑的互溶性問題)，泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測器不穩(wěn)定;

　　10、長期有規(guī)則噪聲，可能原因為室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當(dāng);

在液相色譜操作過程中，我們需要下面的問題，方便維護(hù)液相色譜柱。 A柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。 B.如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根專用柱，這樣有助于延長柱子的壽命。 C.避免壓力和溫度的急劇變化及**機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使液相色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。 D.應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。 E.如使用柱溫控制裝置時，應(yīng)注意在通人流動相后才能升溫。 F.一般說來液相色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。 G.選擇使用適宜的流動相，以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一個預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。 H.避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。 I.經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗液相色譜柱，**保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。 J.保存液相色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。**禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。 K.液相色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi)，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。 L.在完成分離分析工作之后，不能馬上就關(guān)機(jī)，需及時對色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，一般0.5h以上，以除去液相色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。