Thermo液相色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是zui佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

　　1、樣品的前處理：

　　a、使用流動相溶解樣品。

　　b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

　　c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

　　2、流動相的配制：

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

　　a、流動相對樣品具有**的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

　　b、流動相具有**惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

　　c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

　　d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。

　　f、在流動相配制好后，**要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

　　3、流動相流速的選擇：

　　因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求zui佳柱效，使用zui佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

　　當(dāng)選用zui佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

　　Thermo液相色譜柱注意：

　　a．由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。

　　b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。

　　c．含水流動相zui奸在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。加入疊氮化鈉，防止**生長。

　　d．流動相要求使用0.45 μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

　　e．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

　　4、柱性能測試：

　　啟動液相色譜儀：a、流動相流速設(shè)定為1ml／min。

　　b、UV檢測器波長設(shè)定為254nm。

　　使用出廠測試時使用的流動相組成及測試樣品。

　　記錄并計算測試結(jié)果。

液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲（封頭）與柱填料等組成。

柱管：

多用不銹鋼制成，若果使用時柱壓不高于70 kg/cm2時，也可采用厚壁玻璃或石英管，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。用于柱填料的裝填。

壓帽：

即色譜柱兩端套合于柱管端外壁的塑性圓柱帽，中部有小孔，多為聚四氟乙烯制成，用于固定篩板。

密封環(huán)：

位于接頭螺旋環(huán)內(nèi)壁的彈性環(huán)，多為聚四氟乙烯制成，用于色譜柱兩端壓帽與柱外壁的密封。

色譜柱使用前注意事項。

色譜柱在使用前，***hao進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。

在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是***jia條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

但要注意：

柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

1、樣品的前處理

a、***hao使用流動相溶解樣品。

b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

c、使用0.45μm或0.22?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

2、流動相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有**的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)

c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，***hao使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。

f、在流動相配制好后，**要進(jìn)行脫氣。

除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動相流速的選擇

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。

對于一根特定的色譜柱，要追求***jia柱效，***hao使用***jia流速。

對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當(dāng)選用***jia流速時，分析時間可能延長。

可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。

注意：

a．含水流動相***hao在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。***hao加入die氮化鈉，防止**生長。

b．流動相要求使用0.45 μm或0.22m濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

c．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。